摘 要：海参多糖为海参的主要生物活性物质之一，海参多糖的检测方法国内专利申请涉及的不多。该文通过分析国内专利申请，梳理海参多糖检测方法的专利申请情况，为海参多糖检测方法的专利布局提供参考。
　　关键词：海参；多糖；测量方法；专利技术
　　中图分类号 TQ461 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）18-0042-02
　　海参（Sea Cucumber）为棘皮动物门海参纲，全世界约有1100种，我国有100多种，全世界可供食用的海参有40多种，我国有20多种[1]。海参在我国是一种重要的传统海产品，自古至今，海参以其美味的口感，丰富的营养价值，独特的食疗作用和药用价值，被奉为筵上珍品，百补之首[2-4]。海参多糖作为海参的主要活性成分之一，具有抗凝血、抗肿瘤、调节血管平滑肌和内皮细胞、降低血液粘度、防止老年痴呆、防治急性放射性损伤等功效。
　　现有的专利申请中多数涉及海参活性物质，尤其是海参多糖和多肽蛋白的提取，而有关海参多糖的检测方法仍较少。然而，海参多糖的结构复杂，种类繁多，不同种类的海参多糖结构不同，同样种类的海参的多糖含量也不尽相同，因此，合适的海参多糖的检测方法就显得尤为重要。本文就海参多糖测量方法的专利技术进行梳理。
　　1 结构组成
　　研究发现海参体内多糖主要分为2种类型：一种为海参糖胺聚糖或粘多糖，是由D-N-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸、L-岩藻糖和硫酸酯基的重复单位组成的杂多糖，有分支，相对分子量为4万～5万；另一种为是海参岩藻多糖，是由L-岩藻糖构成的直链多糖，相对分子量为6万～8万。这2类结构特殊的多糖，均为海参多糖特有，2类糖基的组成不同，但糖链上的部分羟基都有发生硫酸酯化，硫酸酯基类多糖含量均在32%左右。
　　2 测定方法
　　目前，对海参多糖的测定方法按照测量目的，分为定性测定和定量测定。理化检测方法很多，组织化学方法常用的是染色法、比色法和分光光度法，物理化学法有同位素标记法、凝胶色谱法、电泳法等。
　　对海参多糖的定量检测，主要在于对多糖降解后的单糖组分进行检测分析，最为常见的检测方法为化学显色法，其主要流程为将多糖组分经过分离纯化后，通过咔唑法测定糖醛酸含量从而间接测定含糖醛酸多糖，以及通过Elson-Morgan法测定氨基糖含量。专利申请（CN1624450A，公开日为20050608）公开了一种测定海参中多糖含量的方法，具体测量方法为：将粉碎后的海参样品经碱溶、超声提取、二次醇沉，最后将样品干燥至恒重后测得多糖含量，虽然该方法采用二次乙醇沉淀对样品进行纯化，以超声波清洗仪为反应器，选择垂融坩埚为重量分析容器，具有操作简单，稳定可靠，重现性好，准确度高等特点，但该方法对目标测定物的选择性不强，样品中的杂质如盐、微量元素、蛋白质等成分易引起较大的测定误差，因而不太适合海参制品中海参多糖含量的精确测定；专利申请（CN103454270A，公开日为20131218）记载了一种海参多糖的检测方法，其原理为：海参样品经酶解、离心分离后，酶解液用天青Ⅰ试剂染色，其吸光度（510nm）在一定浓度范围内与多糖质量成正比，以标准多糖溶液作对照，就可采用分光光度法测得供试品中多糖的含量[5-6]。
　　海参多糖中的2种类型糖的结构差异大，不太容易确定具体以何种多糖作为标准品进行分光光度或者液相色谱测定。针对该问题，专利申请（CN101285826A，公开日为20081015）记载了一種海参及海参制品中海参多糖含量的测定方法，它无需复杂的前处理，取样少、简便、灵敏、快速、准确，能满足以海参多糖为评价指标建立海参制品质量标准的要求，具体测量方法为：先将海参及海参制品用蛋白酶酶解，采用醇沉分离出酶解产生的海参多糖，再用三氟乙酸水解制出供试液，配制岩藻糖标准水溶液，以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生，所得衍生物经高效液相色谱测定其中岩藻糖衍生物的峰面积，以岩藻糖为基准计算得出样品中海参制品中的海参多糖含量；专利申请（CN106645483A，公开日为20170510）公开了一种定量检测海参多糖的方法，具体检测方法为：向三氟乙酸水溶液中加入硫酸软骨素及岩藻糖，配制标准（下转84页）（上接42页）样品溶液，提取待测海参或海参制品样品中的多糖，酸水解、除酸，加入氨水、内标物乳糖、衍生化，液相色谱?质谱联用检测含有硫酸软骨素二糖衍生物、岩藻糖衍生物的各浓度标准样品溶液及待测样品溶液，得出待测样品中硫酸软骨素和岩藻糖的含量，进而得到待测样品中岩藻聚糖和岩藻糖基化硫酸软骨素的含量[7-8]。
　　3 结论
　　通过对我国海参多糖测量方法的梳理，发现海参多糖结构复杂，检测方法主要为定量检测，检测方法随着海参原料、海参多糖的提取和纯化工艺有所差别，在实践中应当根据具体的检测要求，选取合适的检测方法。
　　参考文献
　　[1]廖玉麟.中国动物志棘皮动物门海参纲[M].北京：科学出版社，1997.
　　[2]曲凯，范东升，朱镜羲，等.海参产业领域专利技术现状与发展趋势[J].中国渔业经济，2013，31（2）：22-29.
　　[3]林楠，张通博，张闺贤，等.我国海参领域专利技术现状分析[J].科技创新与应用，2015（2）：29-30.
　　[4]潘诚.我国海参专利现状初步分析[J].科学与管理，2008（6）：69-71.
　　[5]中国海洋大学.测定海参中多糖含量的方法，申请号CN200410036250A，公开号CN1624450A[P].2005-06-08.
　　[6]大连海晏堂生物有限公司.一种海参多糖的检测方法，申请号CN201310412043A，公开号CN103454270A[P].2013-12-18.
　　[7]中国海洋大学.一种海参及海参制品中海参多糖含量的测定方法，申请号CN200810016622A，公开号CN101285826A[P].2008-10-15.
　　[8]大连工业大学.一种定量检测海参多糖的方法，申请号CN201611215392A，公开号CN106645483A[P].2017-05-10.